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KAPA NGS FFPE DNA 質(zhì)控試劑盒簡介

發(fā)布時間: 2024-05-28  點擊次數(shù): 496次

 

概述

KAPA NGS FFPE DNA QC 試劑盒在構建 NGS 文庫之前提供可靠的基于 qPCR 的人類 FFPE DNA 樣本鑒定和推薦輸入評估。每個試劑盒都包含優(yōu)化的高性能 qPCR 主混合物、DNA QC 標準和預混形式的引物。引物針對人類長散在核元件 (LINE),提供更高的靈敏度并最大限度地減少 QC 所需的樣本量。

與 DNA QC 標準相比,樣本質(zhì)量通過對短擴增子和長擴增子的相對定量來評估。計算出的標準化質(zhì)量分數(shù) (Q 分數(shù)) 用于計算所需的樣本輸入量,這為高質(zhì)量文庫制備提供了最大的可能性。使用該試劑盒生成的 Q 分數(shù)可用于預測文庫制備的結果并優(yōu)化 FFPE DNA 樣本的文庫構建參數(shù)。

KAPA FFPE DNA QC 試劑盒已在 KAPA HyperPETE 組織 DNA 工作流程中驗證,但理論上可能與 KAPA HyperCap FFPET DNA 工作流程兼容。

KAPA NGS FFPE DNA QC 試劑盒的優(yōu)勢

·       最大限度地提高受損 FFPE DNA 樣本的成功率

·       在一次測定中以最少的投入評估質(zhì)量并推薦投入

·       通過靈活且易于自動化的工作流程節(jié)省寶貴的時間

KAPA NGS FFPE DNA QC 試劑盒的原理

KAPA NGS FFPE QC 試劑盒通過比較 LightCycler ® qPCR 檢測中較大 (191-bp) 擴增子和較小 (66 bp) 擴增子的擴增情況來評估樣本質(zhì)量,該檢測使用針對人類長散在核元件 (LINE) 的引物。針對 LINE 元件可以從極少量的輸入 FFPET DNA 中產(chǎn)生更強的信號,從而獲得更靈敏的結果并很大程度地減少 QC 測試樣本的使用。這可以對質(zhì)量進行可靠的評估,該質(zhì)量評估是整個基因組的平均質(zhì)量,而不是單拷貝的管家基因。此外,與分光光度法和電泳法相比,qPCR 檢測在評估樣本質(zhì)量方面具有更高的靈敏度和準確性。

比較這兩個 qPCR 檢測的相對擴增結果可得出樣本的 Q 值,該 Q 值可與已知數(shù)量的 QC PCR DNA 標準進行比較,作為樣本質(zhì)量的指標。然后可適當調(diào)整低質(zhì)量樣本的輸入 DNA 量,以提高文庫制備成功的可能性。

最大限度地提高受損 FFPE DNA 樣本的成功率

質(zhì)量調(diào)整輸入(Q 輸入)顯著改善了 KAPA HyperPETE 組織 DNA 工作流程中低質(zhì)量 (LQ)、中等質(zhì)量 (MQ) 甚至高質(zhì)量 (HQ) FFPE DNA 樣本的測序覆蓋率指標。

圖 1 . 使用 KAPA NGS FFPE DNA QC Kit 的質(zhì)量調(diào)整輸入,與未調(diào)整的 10 ng 輸入相比,KAPA HyperPETE Pan Cancer 和 Hot Spot Panels 的測序覆蓋率指標顯著提高。低質(zhì)量 (LQ) FFPET DNA 樣本的標準化 Q 分數(shù)范圍為 0.042 至 0.2。在 KAPA HyperPETE 組織 DNA 工作流程中,質(zhì)量調(diào)整(Q 調(diào)整)輸入范圍為 60 至 248 ng。

KAPA NGS FFPE DNA 質(zhì)控試劑盒

圖 2 . 質(zhì)量調(diào)整輸入(Q 輸入)顯著提高了 KAPA HyperPETE 組織 DNA 工作流程中 KAPA HyperPETE Pan Cancer Panel 覆蓋的面板外顯子的百分比,提高了 500 倍或更多。與 10 ng 的覆蓋率相比,低質(zhì)量樣本(LQ)顯示出明顯的改善。但是,中等質(zhì)量(MQ)甚至高質(zhì)量(HQ)樣本也可以通過使用 KAPA NGS FFPE DNA QC Kit 計算的 Q 輸入受益。

KAPA NGS FFPE DNA 質(zhì)控試劑盒

 

 

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